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    細胞是組成自然界生命的基本單位，同時也是重要的生物資源。低溫制冷技術的迅速發展，能夠做到控制細胞的“生死”，充分利用珍貴的細胞資源。

  凍存是長期保存細胞的重要方法，利用凍存技術將細胞置于液氮中保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，細胞進入一種假死狀態。

01

細胞凍存

1. 取對數生長期的細胞移至離心管中。

 對數期細胞是細胞增殖過程中活力旺盛的時期，也是凍存細胞的合理時期，對于貼壁細胞先用胰蛋白酶分離成單個細胞再收集到離心管中，懸浮細胞可直接移至離心管中。

2. 離心去除胰蛋白酶及培養液，加入凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻。

3.細胞計數儀計數，調節細胞的終密度。

4. 將細胞分裝入凍存管中，在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。

5.凍存管放入程序降溫盒，放入超低溫冰箱中過夜。

對于大多數動物細胞，降溫速率通常每分鐘下降1至3℃。的方法是使用程序降溫系統。其次可以使用程序降溫盒，雖然這種方法適用于許多細胞系，但不能提供均勻可控的冷卻，不建議用于珍貴細胞。

6.從超低溫冰箱中取出程序降溫盒，取出凍存管迅速浸入液氮中。

細胞儲存應始終保持溫度低于-130°C。細胞可以在更高的溫度下保存，但生存力通常會隨著時間的推移而降低。理想的儲存容器是液氮罐，出于安全原因，優選選擇氣相液氮儲存。

  無論使用哪種凍存方法，關鍵的是快速高效地將其傳輸到存儲位置。如果不能立即完成，可以將小瓶置于干冰上一段時間。這樣可以避免在轉移過程中發生溫度升高而損害細胞，在這個轉移過程中溫度升高是解凍后影響細胞活力的主要原因。

細胞凍存關鍵因素：

1.適當的處理及溫和收集細胞

2.使用合適的冷凍保護劑

3.細胞凍存的速率

4.合適的儲存溫度

02

細胞復蘇

1.從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。

2.取出凍存管，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并加培養液混勻。

3.離心棄去上清液，加入血清培養液重懸細胞。

4.計數調整細胞密度，放入CO₂培養箱靜置培養。

  細胞凍存及復蘇的基本過程是慢凍快融，這樣可以很大限度的保存細胞活力。細胞凍存時向培養基中加入甘油或二甲基亞砜之類的保護劑可使溶液冰點降低，配合使用4℃冰箱和-20℃低溫冰箱梯度降溫，在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。復蘇細胞則采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。